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操作注意事项：
1. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3. 不用的其它试剂，应包装好或盖好，不同批号的试剂不要混用，保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A易挥发，避免长时间打开盖子，底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒，实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
操作步骤：
1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，每个标准品和空白孔建议做复孔，每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
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